martes, 5 de octubre de 2010

práctica de Extracción de ADN

Objetivo

Conocer y observar la estructura, así como también hacer una comparación analítica del ADN a través de un simple experimento.

Introducción

Para comenzar, el ADN (Ácido Desoxirribonucleico) es el material genético que contienen los organismos, compuestos por nucleótidos (azúcar + fosfato + base nitrogenada) con un modelo de doble hélice. El ADN lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas y la replicación. Se llama síntesis de proteínas a la producción de las proteínas que necesita la célula o el virus para realizar sus actividades y desarrollarse. La replicación es el conjunto de reacciones por medio de las cuales el ADN se copia a sí mismo cada vez que una célula o un virus se reproducen y transmite a la descendencia la información que contiene. En casi todos los organismos celulares el ADN está organizado en forma de cromosomas, situados en el núcleo de la célula.

Se encarga de codificar todo lo que somos nosotros los humanos, las plantas, los animales, el medio en el que vivimos, etc; es decir, que contiene la información de nuestras características físicas, que pueden alterarse por razones del entorno o por cuestiones naturales, a esto le llamamos mutaciones.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Posteriormente debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.


Material:
ü  Chícharos
ü  Lentejas
ü  Licuadora
ü  Vaso de precipitado
ü  Varilla de vidrio
ü  Papel filtro
ü  Agua

Reactivos:
ü  Detergente líquido
ü  Alcohol etílico líquido del 96%
ü  Agua destilada
ü  Sal
ü  Ablandador de carne


Procedimiento:

1)    Licuar la muestra vegetal con el doble agua (H2O) de la muestra vegetal por 30 segundos.
2)    Filtrar la muestra en un vaso precipitado haciendo uso del papel filtro.
3)    Verter una porción de la muestra a un tubo de ensayo.
4)    Añadir la misma cantidad de detergente líquido que la porción de la muestra que hay en el tubo.
5)    Añadir una pizca de ablandador de carne a la muestra.
6)    Añadir una pizca de sal a la muestra.
7)    Agitar suavemente
8)    Dejar en reposo durante 3 minutos.
9)    Ladear el tubo y añadir alcohol a la muestra, deslizándolo por la pared del tubo de ensayo.
10) Dejar que repose el tubo hasta observar las fases bien separadas de la muestra. Observar.
11) Introducir una varilla de vidrio para extraer la hebra del ADN en el tubo.

Observaciones:

Análisis de los resultados

No sucedía algo inmediatamente, lo que pasaba después del tiempo, era que se formaba poco a poco un producto filamentoso (obtenido de la extracción) no es ADN puro, porque se podría decir que con el detergente líquido se pudo romper la membrana plasmática y nuclear para hacer posible que el ADN saliera a agruparse de forma visible en el tubo de ensayo, por lo tanto, si está físicamente ahí visible, se debió combinar con el mismo ARN y quizás otras moléculas.

La extracción de ADN requirió una serie de etapas básicas:
ü  En primer lugar, se tenía que romper la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula.
ü  Luego también era necesario romper la membrana nuclear para dejar libre el ADN.
ü  Por último, proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo, para lo que se fue utilizado el alcohol, como para aislar a el ADN de otras partículas que pudieran interferir con ellas.


Cuestionario

1.    ¿Qué partes pudiste observar cuando separamos la muestra, al ser mezclada con la sal, el detergente, el ablandador, etc.?
Pudimos encontrar mediante la observación que en medio del tubo de ensayo (no exactamente en medio) se formaba ése producto filamentoso blanquecino que era ADN, arriba se encontraba el alcohol bien definido por el color transparente; y al final en el fondo estaban mezclados los restos de los chícharos, los pigmentos de este y del detergente, junto con las proteínas y los azúcares.

2.    La sal de mesa y el detergente ayudados por la acción de la licuadora ¿Qué efecto producen en la muestra?
Estos dos a su vez contribuyen a romper la membrana plasmática de la célula y a la envoltura nuclear.

3.    ¿Qué es el ablandador?
La papaína es una enzima que se extrae del fruto llamado papaya y es este familia de las papaína que según el tipo de tejidos se encuentran relacionadas. Desde poder antiinflamatorio hasta distintas aplicaciones en procesos industriales se cuentan entre las propiedades de la papaína y que permite utilizar el fruto en distintas dolencias como un medicamento natural.

4.    ¿Qué función tiene el ablandador?
La papaína se encarga de romper algunos enlaces entre aminoácidos presentes en las proteínas de la carne, en el caso del experimento, rompió los enlaces de los aminoácidos de la célula para que las proteínas de la célula se dispersen para permitir que el ADN quede separado.

5.    ¿Qué función tiene el alcohol?
Lo que hizo el ADN fue precipitar el ADN que es soluble en agua pero, por lo que se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua.

6.    ¿Cuál fue la función de la sal en el experimento?
Lo que hizo la sal fue evitar que las células y las proteínas presentes en la célula se vuelvan a agrupar o a unir por ser una concentración isotónica.

Conclusiones

La licuadora creó una fuerza centrífuga para ir permitiendo al principio el rompimiento de la membrana celular, pero se necesitó de otro complemente para lograr romper la envoltura nuclear, en este experimento se usó el ablandador de carne, para seguir rompiendo la membrana plasmática y también la nuclear, para evitar que se volvieran a agrupar la proteínas, azúcares y moléculas presentes se utilizó la sal. el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.
Todas estas acciones en conjunto al final permitieron que el ADN se hiciera visible a simple vista. Si las células, y mucho menos su ADN es visible al ojo humano, esta práctica demuestra que el ADN es muy extenso, como hemos visto en clase, que pueden llegar a medir 1.8 metros.


Reflexión

La investigación sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el ámbito de la medicina. A través de la tecnología del ADN, los científicos pueden modificar microorganismos que llegan a convertir en auténticas fábricas para producir grandes cantidades de sustancias útiles. Los estudios sobre el ADN humano también revelan la existencia de genes asociados con enfermedades específicas como la fibrosis quística y determinados tipos de cáncer. Esta información puede ser valiosa para el diagnóstico preventivo de varios tipos de enfermedades. Y a través de esta práctica se pudieron observar y analizar las funciones que desempeñan los materiales para hacer posible la extracción del ADN a partir de una forma sencilla.

Referencias:
·         (n.a.) ADN y ARN (publicado el 12 de marzo del 2007). Recuperado desde http://www.mitareanet.com/colaboraciones/ADNyARN.htm

·         (n.a.) Extracción del ADN (publicado el 6 de junio del 2006) Recuperado desde http://www.scribd.com/doc/8211896/Extraccion-de-ADN

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